Chapitre 7, Manuel de biosécurité : Décontamination

La décontamination des cultures et des objets contaminés par des agents biologiques est couramment effectuée dans les laboratoires de microbiologie. La décontamination est un élément essentiel des pratiques de sécurité microbiologique et sert à protéger le personnel de laboratoire (ainsi que les autres) contre les infections, ainsi que la libération d'organismes infectieux dans l'environnement extérieur. La décontamination des milieux, des surfaces de travail et de l'équipement est également nécessaire pour prévenir la contamination des organismes cultivés.

La décontamination des surfaces de travail, de l'équipement, des enceintes de sécurité biologique et d'autres objets inanimés à l'aide d'agents antimicrobiens est appelée désinfection. Plusieurs agents chimiques sont utilisés comme désinfectants. Les travailleurs de laboratoire doivent se rappeler qu'il existe des risques associés à tous ces désinfectants chimiques. L'inhalation et le contact avec la peau doivent être minimisés et le contact avec les yeux doit être évité. Des gants et des lunettes de sécurité appropriés doivent toujours être portés lors de la manipulation de ces produits chimiques.

La sensibilité des microbes aux désinfectants chimiques varie en fonction de leur structure physique et de leur état physique (par exemple, état de spores plus résistant). Par exemple, la paroi cellulaire externe cireuse des mycobactéries offre une résistance accrue. Les virus dépourvus de lipides dans la capside externe les rendent plus hydrophiles et généralement plus résistants aux désinfectants chimiques que les virus lipophiles. L'ordre de résistance des microbes aux désinfectants chimiques, du plus résistant au moins résistant, est présenté à la page suivante.

Voici une liste des résistances des microbes aux désinfectants chimiques, classées du plus résistant au moins résistant :

* Adapté de Biological Safety: Principles and Practices, Fleming, DO and Hunt, DL, eds, 4th Edition (2006), ASM Press, Washington, DC

Les informations pertinentes pour certains des désinfectants chimiques courants sont résumées sous forme de tableau à la fin de ce chapitre.

L'autoclavage utilise de la vapeur saturée sous pression (environ 15 psi) pour atteindre une température dans l'autoclave d'au moins 121 °C (250 °F). L'autoclavage peut être utilisé pour détruire les bactéries végétatives, les spores bactériennes et les virus. Lors de la décontamination de déchets biologiques dangereux, il est recommandé que la température dans les déchets atteigne au moins 115 °C pendant au moins 20 minutes. Le temps de traitement total requis pour satisfaire à ces conditions dépend de plusieurs facteurs de charge (voir ci-dessous); cependant, un cycle d'autoclave minimum d'une heure doit être utilisé lors de la décontamination des déchets biologiques dangereux.

Il y a trois facteurs qui, combinés, déterminent l'efficacité de l'autoclavage :

Température - l'autoclave utilise de la vapeur sous une pression d'environ 15 psi pour atteindre une température de chambre d'au moins 121 °C. Bien que la chambre de l'autoclave puisse atteindre 121 °C, cela ne signifie pas nécessairement que l'intérieur de la charge atteindra cette température.

Temps - un temps de cycle d'autoclave minimum de vingt minutes à une température de chambre de 121 ° C (le temps ne commence pas dès que le cycle d'autoclave est lancé) est généralement recommandé pour la stérilisation des articles propres. Cependant, le temps de traitement total requis pour réaliser la décontamination dépend de plusieurs facteurs de charge, y compris le conteneur de charge (propriétés de transfert de chaleur), la quantité d'eau contenue dans la charge et le poids de la charge. Pour des charges accrues, un temps de cycle plus long est nécessaire pour assurer une décontamination efficace. Pour le traitement des déchets biologiques dangereux, un temps d'autoclavage minimum de 60 minutes est requis. Les dérogations au temps d'autoclavage minimum de 60 minutes seront examinées au cas par cas et doivent être approuvées par le responsable de la biosécurité ou le comité de biosécurité de l'établissement. Les demandes d'exemption doivent être soumises à l'agent de biosécurité avec une SOP écrite qui décrit les déchets biologiques dangereux, les conditions de l'autoclave, la durée de l'autoclave et la procédure de test d'efficacité de l'autoclave et la fréquence des tests. En aucun cas, un temps d'autoclavage inférieur à 30 minutes ne sera approuvé.

Contact - la saturation en vapeur est essentielle pour un transfert de chaleur maximal. La vapeur doit entrer en contact avec toutes les zones de la charge. Les sacs d'autoclave et autres récipients doivent être laissés partiellement ouverts (ou permettre l'entrée de vapeur) pour assurer un contact adéquat. Des études ont montré que l'ajout d'eau à l'intérieur du sac améliore le profil temps-température du cycle de l'autoclave, augmentant ainsi l'efficacité de stérilisation de l'autoclave.

Il existe des exigences spécifiques pour la décontamination des déchets biologiques dangereux avant leur élimination. Voir le chapitre 12 pour les procédures d'autoclavage relatives aux déchets biologiques dangereux.

Les autoclaves doivent être régulièrement entretenus et réparés par des techniciens qualifiés. De plus, la loi de l'État du Nevada exige que les autoclaves d'un volume interne supérieur à 5 pieds cubes soient inspectés chaque année par un inspecteur certifié. Ce service est actuellement effectué sans frais par la compagnie d'assurance de l'Université. Appelez EH&S au 775-327-5040 pour programmer un autoclave pour inspection. Des informations supplémentaires sur l'utilisation de l'autoclave sont disponibles dans le manuel de sécurité de l'autoclave Reno de l'Université du Nevada.

La chaleur sèche est moins efficace que la chaleur humide (autoclavage) ; nécessitant une température plus élevée et un temps de contact plus long. Néanmoins, la chaleur sèche est préférable à la chaleur humide pour la décontamination des matériaux anhydres et des récipients fermés. Cela est dû au fait que le composant d'humidité de la vapeur utilisée dans un autoclave ne pénètre pas efficacement dans les matériaux anhydres et les récipients fermés. La température équivalente de chaleur sèche la plus élevée que ces matériaux atteindront dans un autoclave est de 121 °C. La température la plus élevée que le matériau atteindra dans un four à chaleur sèche sera la température réelle à l'intérieur du four. Une température de 160-180 °C pendant 3-4 heures est recommandée pour la décontamination des déchets à l'aide d'un four à chaleur sèche.

Le tableau provient de : Laboratory Safety : Principles and Practices, deuxième édition (1995), Diane O. Fleming, John H. Richardson, Jerry J. Tulis et Donald Vesley, eds., American Society for Microbiology, Washington, DC

concentration : 70-85 %

temps de contact : 10-30 min.

conc. : 0,05-0,5 % (eau de Javel commerciale 5 %)

temps de contact : 10-30 min.

conc. : 0,1-2 %

temps de contact : 10-30 min.

conc. : 0,2-3 %

temps de contact : 10-30 min.

conc. : 0,47 %

temps de contact : 10-30 min.

concentration : 4-8 %

temps de contact : 10-30 min.

conc. : 2 %

temps de contact : 10-600 min.

En raison de ses caractéristiques irritantes et de son statut cancérogène, le formaldéhyde ne doit pas être utilisé sans une bonne ventilation par aspiration locale.

L'inactivation d'une toxine signifie qu'elle est rendue non fonctionnelle et n'est plus capable d'exercer ses effets toxiques. Cela diffère de l'inactivation d'un agent biologique, qui rend le matériel biologique non viable et incapable de se développer, de se répliquer, d'infecter ou de provoquer des maladies. Les méthodes d'inactivation utilisées pour les toxines biologiques doivent être spécifiques à la toxine. L'inactivation peut avoir lieu par des moyens physiques, y compris l'autoclavage ou par des moyens chimiques. Le BMBL fournit les tableaux suivants pour aider à fournir des conseils sur l'inactivation des toxines biologiques.

Adapté du BMBL. Le tableau suivant provient de : Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, cinquième édition (2009), US Department of Health and Human Services, Center for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health.

Ce tableau provient de : Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, cinquième édition (2009), US Department of Health and Human Services, Center for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health

ND indique "non déterminé" d'après la littérature disponible sur la décontamination.

Chapitre 8 : Ventilation de laboratoire pour la biosécurité